Schizosaccharomyces pombe

Protocoles

Midi-prep (rapide mais ± propre)

  1. Transférer 25 mL de culture bactérienne dans un falcon de 50 mL
  2. Centrifuger 10 minutes à 4ºC
  3. Jeter le surnageant
  4. Resuspendre le culot dans 2 mL de solution I
  5. Ajouter 2 mL de solution II (mini-prep) NE PAS VORTEXER
  6. Ajouter 2 mL de chloroforme
  7. Attendre 1 minute à température pièce
  8. Ajouter 1.5 mL de solution III
  9. Centrifuger 10 minutes à 4ºC
  10. Récupérer le surnageant dans un nouveau falcon (éviter les débris de la couche intermédiaire)
  11. Préparer un mélange phénol / chloroforme 1:1
  12. Ajouter un volume égal de phénol / chloroforme au surnageant
  13. Centrifuger 10 minutes à 4ºC
  14. Récupérer le surnageant
  15. Ajouter 2 volume d’EtOH anhydre
  16. Ajouter 1/10 (du volume final à l’étape précédente) d’acétate de sodium 3M pH 5.2
  17. Centrifuger 10 minutes à 4ºC
  18. Laver avec 10 mL d’EtOH 70%
  19. Centrifuger 10 minutes à 4oC et garder le culot
  20. Sécher complètement le culot
  21. Resuspendre dans H2O avec RNAse (40ug/mL)
  22. Dissoudre culot 5 minutes à 65ºC ou 45 minutes à 37ºC
Modifié à partir d'un protocole de Midi-prep de Jean-Claude Labbé.